Effect of 8-oxoguanine and abasic site DNA lesions on in vitro elongation by human DNA polymerase in the presence of replication protein A and proliferating-cell nuclear antigen

摘要

DNA pol（聚合酶）被认为是真核生物中的前导链复制酶。在本文中，我们显示了人类DNA pol通过在模板链上插入dCMP或dAMP可以有效地绕过模板链上的8-oxo-G（7,8-dihydro-8-oxoguanine）病变，但它不能绕过一个无基础的网站。复制过程中，DNA pols与辅助蛋白结合，可能会改变其旁路能力。我们调查了人类DNA滑动钳位PCNA（增殖细胞核抗原）和人类单链DNA结合蛋白RPA（复制蛋白A）在调节DNA合成和DNA pol的转移能力中的作用。 RPA抑制了人类DNA pol在退火至短引物的模板上的延伸。 PCNA不会影响DNA pol的延伸率，也不会抑制RPA引起的延伸率。当增加引物的长度时，RPA抑制作用显着降低。在带有8-oxo-G损伤的模板上，这种抑制作用对病灶外的DNA复制更为明显，这表明RPA可能在与8-oxo-G结合后阻止DNA pol的延伸。 PCNA和RPA都不会对DNA pol无法复制通过AP位点的能力产生任何影响，而与引物长度无关。